Actualización: 26 julio 2010
Para lograr aislamientos axenicos de hongos es necesario suplementar el medio de crecimiento con antibióticos beta-lactamicos; los cuales inhiben la síntesis de peptidoglican en la pared celular de las bacterias. Los antibióticos beta-lactamicos se subdividen en: carbapenemas, penicilinas, cefalosporinas, y monobactamas. Los beta-lactamicos de primera generación controlan sólo los Gram positivos, los de generaciones posteriores afectan la pared de los dos, Gram positivos y Gram negativos.
No se deberían usar antibióticos no beta-lactamicos porque estos podrían también inhibir el crecimiento del hongo de interés que se esta aislando. Esto porque los antibióticos no beta lactamicos inhiben procesos comunes en procariotes y eucariotes, como por ejemplo la síntesis de proteínas.
Los antibióticos beta-lactamicos que se encuentran en el laboratorio son la carbenicilina y la ampicilina.
La sal disodio de carbenicilina es soluble en agua, 10mg/ml, etanol y metanol
http://www.gencompare.com/carbenicillin.htm
http://www.drugbank.ca/drugs/DB00578
El trihidrato de ampicilina es muy poco soluble en agua 5 mg/ml (Liu 2006 J. Chinese Chemical Society 53:851-856). Es mejor utilizar la sal sodica de ampicilina, la cual tiene una solubilidad en agua de 50 mg/ml.
http://www.sigmaaldrich.com
Otro antibiótico beta-lactamico que puede ser usado es la amoxicilina, esta también es poco soluble, en agua 4 mg/ml y 7,5 mg/ml en metanol
Antibióticos beta-lactamicos:
http://en.wikipedia.org/wiki/Beta-lactam_antibiotic
Purificación de hongos filamentosos de levaduriformes
Utilizar el fluconazol para purificar los hongos filamentosos de hongos levaduriformes. El fluconazol también es poco soluble es agua (5mg/ml es soluble, pero no 15 mg/ml, es necesario ensayar si es soluble a 10 mg/ml) Khattab (poster). El fluconazol inhibe la sintesis de esteroles en los hongos, haciendo que el hongo produzca un esterol diferente, por lo que estos inhibidores son fungistáticos. Cuando el hongo se transfiera al medio suplementado con fluconazol hay que observarlo diariamente y cuando el micelio crezca un poco, este debe ser transferido a un nuevo medio, eso debería ser suficiente para inhibir las levaduras y limpiar el micelio de ellas.
Concentraciones de las soluciones madre:
Sal disodio de carbenicilina 10 mg/ml en agua destilada estéril
Trihidrato de ampicilina 5 mg/ml en agua destilada estéril
Sal sodica de ampicilina 50 mg/ml en agua destilada estéril
Amoxicilina 4 mg/ml en agua destilada estéril
Fluconazol probar sí 10 mg/ml es soluble en agua, sino hacer 5 mg/ml
Almacenar las soluciones madre a
Concentraciones finales a ser usadas:
Aislamiento de hongos de material vegetal, cultivos monosporicos y cultivo de almacenamiento = 0,1mg/ml de carbenicilina y ampicilina
Cultivo monosporico en fitogel agua, purificación de filamentosos de levaduriformes = 0,1 mg/ml
NOTA: hacer la solución en condiciones de esterilidad, almacenar a 5C y usar entre un mes.
